Hvordan beregnes DNA-konsentrasjonen ved hjelp av spektrofotometer?
Hvordan beregnes DNA-konsentrasjonen ved hjelp av spektrofotometer?

Video: Hvordan beregnes DNA-konsentrasjonen ved hjelp av spektrofotometer?

Video: Hvordan beregnes DNA-konsentrasjonen ved hjelp av spektrofotometer?
Video: DNA concentration 2024, November
Anonim

DNA-konsentrasjon er estimert av måle absorbansen ved 260nm, justere A260 måling for turbiditet ( målt etter absorbans ved 320nm), multiplisere av fortynningsfaktoren, og ved hjelp av forholdet som en A260 på 1,0 = 50 ug/ml rent dsDNA.

Folk spør også, hvordan finner du konsentrasjonen og renheten til DNA?

Å evaluere DNA-renhet , mål absorbansen fra 230nm til 320nm for å oppdage andre mulige forurensninger. Den vanligste renhetsberegning er forholdet mellom absorbansen ved 260 nm delt på avlesningen ved 280 nm. God kvalitet DNA vil ha en A260/EN280 forhold på 1,7–2,0.

På samme måte, hva er en god DNA-konsentrasjon? EN god kvalitet DNA prøven skal ha en A260/EN280 forhold på 1,7-2,0 og en A260/EN230 forhold på over 1,5, men siden følsomheten til forskjellige teknikker for disse forurensningene varierer, bør disse verdiene kun tas som en veiledning for renheten til prøven.

Angående dette, hvordan beregner NanoDrop DNA-konsentrasjon?

Du multipliserer verdien av absorbans ved 260 nm med en fast faktor (det er 50 for DNA ) og du får DNA-konsentrasjon . Voilá. (Ok, teknisk sett er det A260 til en 10 mm tykk prøve som multipliseres med 50; NanoDrop uttrykker A260 som om prøven var 10 mm tykk, som i en standard kyvette).

Hvorfor måtte vi bruke et spektrofotometer for å kvantifisere vårt DNA?

EN spektrofotometer er i stand til å bestemme de gjennomsnittlige konsentrasjonene av nukleinsyrene DNA eller RNA tilstede i en blanding, så vel som deres renhet. Ved hjelp av Beer-Lambert-loven det er mulig å relatere mengden lys som absorberes til konsentrasjonen av det absorberende molekylet.

Anbefalt: