Hvor mye koster det å transformere en ligering?

2024 Forfatter: Miles Stephen | [email protected]. Sist endret: 2023-12-15 23:39

Transformasjon . Tilsett mellom 1-5 µl av ligering blanding til kompetente celler for transformasjon . Forlenget ligering med PEG forårsaker et drop-off in transformasjon effektivitet (Rask Ligering Sett). Elektroporering anbefales for store konstruksjoner (>10 000 bp).

Herav, hvor mye ligasjonsprodukt trenger jeg for transformasjon?

Transformasjon . Tilsett mellom 1-5 µl av ligering blanding til kompetente celler for transformasjon . Forlenget ligering med PEG forårsaker et drop-off in transformasjon effektivitet (Rask Ligering Sett). Elektroporering anbefales for store konstruksjoner (>10 000 bp).

Deretter er spørsmålet, hva er Ligation og transformasjon? I et typisk kloningseksperiment setter forskere først inn et stykke DNA, for eksempel et gen, i et sirkulært stykke DNA som kalles et plasmid. Dette trinnet bruker restriksjonsenzymer og DNA-ligase og kalles en ligering . Etter en ligering , er neste trinn å overføre DNA til bakterier i en prosess som kalles transformasjon.

Deretter kan man også spørre hvor mye DNA som trengs for en ligering?

Den totale konsentrasjonen av vektor + innskudd bør være mellom 1-10 Μg/ml for effektiv ligering . Vektor: Molforhold mellom 1:1 og 1:10 anbefales (1:3 er typisk). Hvis du er usikker på din DNA konsentrasjoner, utføre flere ligeringer med varierende forhold.

Hvor lenge kan du lagre en ligeringsreaksjon?

Ligasjoner kan gjøres ved romtemperatur eller kjøligere (tenk 12-16°C) over natten eller til og med i noen dager, hvis du er veldig opptatt. Du kan også lagre en ligering i kjøleskapet og ta den ut senere for å fortsette å ligere ved romtemperatur så lenge lang som nødvendig.