Hva er hensikten med PCR-produktrensingen?

2024 Forfatter: Miles Stephen | [email protected]. Sist endret: 2023-12-15 23:39

Rensing av DNA fra en PCR reaksjon er vanligvis nødvendig for nedstrøms bruk, og letter fjerning av enzymer, nukleotider, primere og bufferkomponenter. Tradisjonelt ble dette oppnådd ved bruk av organiske ekstraksjonsmetoder, slik som fenolkloroformekstraksjon, etterfulgt av etanolutfelling.

Spørsmålet er også hvorfor det er nødvendig å rense PCR-produkter?

Du trenger å rense PCR-produkter å kvitte seg med ubrukte primere, nukleotider og enzymer for å optimere suksessen med ligering, som vil opprettholde og sekvensere produkt av PCR . Til rense de PCR-produkter , brukes størrelseseksklusjonskromatografi.

I tillegg, hva bør jeg gjøre etter PCR? For å maksimere utvinningen, skyll retentatkoppen to ganger med 10 til 20 µL TE eller vann. Finalen PCR reaksjon kan inneholde opptil et mikrogram amplifisert DNA som kan brukes til en rekke molekylærbiologiske anvendelser. Disse applikasjonene kan være mer eller mindre følsomme for de resterende komponentene i PCR reaksjonsblanding.

Man kan også spørre, hvordan rengjør man PCR-produkter?

Klassiske metoder brukes til ren opp PCR-produkter før sekvensering inkluderer gelelektroforese, etanolutfelling og kolonnekromatografi. Selv om de er ganske effektive, kan disse metodene raskt bli tungvinte når du behandler flere prøver parallelt og viser varierende grad av prøvetap.

Hvorfor må DNA renses?

Vi ren opp DNA fra vandige løsninger for å fjerne buffersalter, enzymer eller andre stoffer som kan påvirke nedstrømsapplikasjoner. Eksempler inkluderer PCR-reaksjon ren opp, ren opp etter restriksjon fordøyer og ren opp av genomisk eller plasmid DNA forurenset med cellulære proteiner/rester.